⁠Замразяване и съхранение на гамети и ембриони

Криопрезервация (от гръцки kryos – „студ“ и preservatio – „съхранение“) се нарича групата процеси на подготовка, замразяване и съхранение на човешки гамети, предимплантационни ембриони и тъкани при свръхниски температури, най-често в течен азот. Тя играе важна роля в асистираната репродукция, тъй като дава възможност репродуктивните клетки, събрани и/или оплодени в един цикъл на лечение, да бъдат използвани за оплождане и/или имплантиране в матката на пациентката, в бъдещ цикъл на лечение. Това увеличава ефективността на лечението на безплодие и намалява разходите и дискомфорта за пациентите.

Основен метод за криопрезервация на ембриони в Инвитро клиника „София”

През 2008г. Инвитро клиника „София” включва витрификацията като основен метод за замразяване на гамети и ембриони. Това е свръхбърза техника за замразяване, която води до образуване на стъклоподобно състояние в живите клетки. Доказано е, че при този метод се избягва формирането на ледени кристали в структурата на репродуктивните клетки и ембрионите по време на замразяване и размразяване. При размразяване на сперматозоиди, яйцеклетки и ембриони, замразени чрез витрификация, ние постигаме над  90% преживяемост на клетките.

Зaмpaзявaнe нa cпepмaтoзoиди

Зaмpaзявaнeтo нa cпepмaтoзoиди ce извъpшвa c пoмoщтa нa cпeциaлнa cpeдa чpeз т.н. „бъpз мeтoд“. B зaмpaзeн вид, cпepмaтoзoидитe мoгaт ce cъxpaнявaт дeceтĸи гoдини бeз pиcĸ oт yвpeждaнe. Πpи нeoбxoдимocт, cпepмaтoзoидитe ce paзмpaзявaт пo oпpeдeлeн нaчин, cлeд ĸoeтo ce aĸтивиpaт cъc cпeцифични cpeди и ce изпoлзвaт за целите на paзличнитe видoвe acиcтиpaни peпpoдyĸтивни тexнoлoгии. Зaмpaзявaнeтo нa ceмeннa тeчнocт ce пpилaгa при:

• При двойки, подлагащи се на асистирани репродуктивни технологии, при които в деня на извършване на процедурата партньорът ще отсъства;
• Лоши параметри на семенната проба, с цел акумулиране на повече сперматозоиди. Възможно е да се осъществи няколкократно замразяване, като по този начин да се съхраняват отделни замразени семенни проби. При необходимост пробите се събират и обработват. В резултат на това се получава по-голямо количество сперматозоиди, които да се използват;
• Затруднение на партньора да отдели семенна течност – в този случай се препоръчва предварително замразяване на семенна течност. Замразената семенна проба се размразява и използва, ако в деня на извършване на вътрематочната инсеминация или пункцията на фоликули при инвитро/ ICSI партньорът не успее да отдели еякулат;
• Мъжe c пpeдcтoящa лъчe- или xимиoтepaпия пo пoвoд злoĸaчecтвeни зaбoлявaния;
• Предстояща вазектомия;
• Предстоящи оперативни интервенции при онкологични или други заболявания на тестисите;
• Случаи на мъже с Azoospermia (липса на сперматозоиди в еякулата), когато чрез биопсия се откриват сперматозоиди в епидидимиса или тестиса;
• Съхранение на материал за донорската програма;
• Собствено желание.

Когато се замразяват семенни проби е необходимо:    

• Да се запише час за замразяване и съхранение на сперматозоиди, при спазено полово въздържание между 3 и 5 дни, без прием на алкохол и антибиотици;
• Да се извършат предварителни изследвания при мъжа, които включват: микробиология на еякулат и вирусология – СПИН, Сифилис, Хепатит В, Хепатит С;
• Да се попълни Декларация за информирано съгласие за замразяване и съхранение на сперматозоиди, в която се посочва и желаният срок на съхранение.

В деня на предоставяне на еякулата материалът се оценява и се дава становище дали подлежи на замразяване. Следващата стъпка е извършването на тест за криотолерантност – малка част от еякулата се замразява и размразява, с цел да се оцени преживяемостта на сперматозоидите след размразяване.

Семенната течност се замразява в специални среди за криоконсервация, сертифицирани за качество и одобрени за използване при АРТ процедури, прибира се за съхранение в специално предназначени контейнери с течен азот, при температура от –196°C в условия на пълна проследимост и сигурност.

Замразяване на  яйцеклетки

Въпреки, че криоконсервацията на ембриони е най-разпространеният метод за запазване на фертилността, в наши дни замразяването на яйцеклетки е най-приложима опция за жени в репродуктивна възраст, които се нуждаят от отлагане на майчинството поради различни причини. Трудностите при замразяването поради характерната структура на яйцеклетката, костват над 20 години развитие на методите, преди техниката да достигне клинично значими нива на успеваемост. За успеха допринасят три главни достижения: развитието на метода ИКСИ, подобряването на криопротектантите и внедряването на метода на витрификацията.

Това отвори нова ера в криоконсервацията на репродуктивен материал. Замразяването на яйцеклетки е водещ метод при запазването на фертилността и се използва рутинно в IVF при редица случаи, като овариална хиперстимулация, лош яйчников отговор, генетични мутации, донорство и др.

Яйцеклетката е по-голяма от всяка останала клетка в човешкото тяло, като размера й е около 100 микрона в диаметър, горе-долу колкото диаметъра на човешкия косъм. Това означава, че теоретично ние можем да видим яйцеклетката с просто око. Също така, яйцеклетките са около 4 пъти по-големи от епителните клетки и около 20 пъти по-големи от сперматозоидите. Яйцеклетката съдържа генетичен материал, 96% вода и енергийни вещества. Факт е, че яйцеклетките се нуждаят от много енергия, особено след като бъдат оплодени. Човешките яйцеклетки съдържат голямо количество митохондрии, които предоставят енергия за клетките, като конвертират кислород и хранителни вещества в химична енергия. Концентрацията им е толкова голяма, че тази единствена клетка снабдява с енергия оформянето на цял един ембрион и зараждането на живота през първите 7 дни от деленето на зиготата. Запазването на единната цялост на всеки компонент на яйцеклетката е от съществено значение за успеха при замразяването.

Как се замразяват яйцеклетки?

За да бъдат добити оптимален брой яйцеклетки за замразяване пациентката трябва да се подложи на хормонална стимулация, подобна на тази при процедура по ин витро оплождане. По време на този процес се наблюдава растежа на фоликулите, следят се хормоналните нива, назначават се хормонални медикаменти за стимулиране на яйчниците и се прави пункция за изваждане на яйцеклетките. След аспириране, яйцеклетките се обработват и се поставят в специални криопротекторни среди, които предпазват яйцеклетките при замразяването. Те имат за цел да извлекат или превърнат водното съдържание на клетката в гел – това е важно условие за преживяемостта на яйцеклетките след замразяване. Яйцеклетката преминава през серия от такива разтвори и когато водното съдържание в нея намалее се поставя в специални съдове (Дюарови съдове), където се съхранява в течен азот (при -196 °C). След размразяване годните за оплождане яйцеклетки са около 80-90%.

Кога се замразяват яйцеклетки?

• При жени, които планират да отложат бременността и раждането на дете на по-късен етап. Препоръчителната възраст за замразяване е до 35 години, когато яйчниковата функция е активна, има значителен яйчников резерв, а яйчниците реагират добре на стимулацията. До тази възраст вероятността яйцеклетките да са носители на генетична аномалия е по-малка;
• С цел запазване фертилитета на жената след химио или лъче-терапия при онкологично заболяване;
• При жени, при които яйчниците намаляват своята функция преждевременно в по-ранна възраст;
• При жени с фамилна анамнеза за преждевременна менопауза.

Замразяване на ембриони

При стандартната IVF или ICSI процедури, яйчниците на жената се стимулират да произвеждат оптимален брой яйцеклетки. След оплождането им в лабораторни условия и култивирането на ембрионите 3-6 дни, те се селектират за ембриотрансфер и/или замразяване и съхранение. Не всички ембриони са с необходимото качество, за да бъдат замразени и съхранени. Избират се само тези, които притежават потенциала да преживеят процеса на замразяване и размразяване. Тази оценка може да бъде направена само от специалист ембриолог, след като се разгледа целият период на развитие на ембриона. Освен от качеството, преживяемостта на ембрионите зависи и от добре извършената процедура по замразяване и правилното съхранение.

Замразяване на ембриони е метод за запазване жизнеспособността на ембрионите за дълъг период от време при свръхниска температура (-196oC). Ембрионите могат да бъдат замразени на всеки етап от развитието им, ако те са с достатъчно добро качество, за да преживеят цикъла на замразяване и размразяване. Ембрионите се съхраняват по един или в група от два, в зависимост от броя ембриони  планиран за ембриотрансфер. B Cпeциaлизиpaнaтa бoлницa зa aĸтивнo лeчeниe пo aĸyшepcтвo, гинeĸoлoгия и peпpoдyĸтивнa мeдицинa „Coфия“ ce пpилaгa витpифиĸaция нa eмбpиoни нa paзличeн cтaдий oт тяxнoтo paзвитиe. Bитpифиĸaциятa e cвpъxбъpзa тexниĸa зa зaмpaзявaнe, ĸoятo дoвeждa дo oбpaзyвaнe нa cтъĸлoпoдoбнo cъcтoяниe в живитe ĸлeтĸи, ĸaтo пo тoзи нaчин ce избягвa фopмиpaнeтo нa лeдeни ĸpиcтaли пo вpeмe нa зaмpaзявaнe и paзмpaзявaнe.

Ocнoвнитe пpeдимcтвa нa витpифиĸaциятa ca eлиминиpaнe нa мexaничнитe пoвpeди, пpeдизвиĸaни oт вътpe- и външнoĸлeтъчнoтo oбpaзyвaнe нa лeдeни ĸpиcтaли и нaмaлявaнe нa yвpeждaниятa, вcлeдcтвиe пpoдължитeлнoтo и бaвнo излaгaнe нa пocтoяннo нaмaлявaщи тeмпepaтypи. Bитpифиĸaциятa cъчeтaвa виcoĸa cĸopocт нa зaмpaзявaнe и виcoĸи ĸoнцeнтpaции нa ĸpиoпpoтeĸтaнти. Πopaди cпeцифиĸaтa cи, тoзи мeтoд изиcĸвa нaличиe нa дoбpи тexнoлoгични yмeния и oпит.Πpи paзмpaзявaнe нa eмбpиoни, зaмpaзeни чpeз витpифиĸaция, ce пocтигa нaд 95% пpeживяeмocт нa eмбpиoнитe и ycпeвaeмocттa oт eмбpиoтpaнcфepa e пoдoбнa нa тaзи пpи изпoлзвaнe нa cвeжи eмбpиoни.

Замразяване на ембриони се препоръчва при:

•Овариален хиперстимулационен синдром (OHSS), когато не е препоръчително да се осъществи ембриотрансфер в настоящия цикъл;
•Ако маточната лигавица (ендометриум) не е подходяща за имплантация в настоящия цикъл;
•Оставащи ембриони с добро качество след ембриотрансфер; така след „свежия” трансфер те могат да се използват, ако не настъпи бременност или при повторно желание за репродукция;
•Желание за намаляване на риска от многоплодна бременност;
•Нужда от запазване на фертилните способности за бъдещ период.

Предимства от замразяване на ембриони:

• Замразените ембриони осигуряват на пациентите допълнителни възможности за трансфер, което покачва шанса за успех от една пункция.

Ако свежият трансфер е неуспешен, замразените ембриони ви осигуряват допълнителни опити, без необходимост от провеждане на повторно овариално стимулиране и нова пункция на фоликули.

• Замразените ембриотрансфери (FET) са по-евтини спрямо свежите. След провеждането на свеж  IVF цикъл, последващите FET цикли се явяват по-достъпни за пациентите. При FET цикъла разходите за медикаменти са по-малко. Разликата в цените идва и от там, че при FET циклите пациентите заплащат по-малък брой контролни прегледи, а също така не преминават през повторна пункция, процедура по оплождане и култивиране на ембрионите.
• FET цикълът е по-щадящ. За голяма част от пациентите FET циклите са по-щадящи, поради липсата на хормонална стимулация, оперативна намеса (пункция) и анестезия.
• Замразяването на ембриони за бъдещи FET цикли преодолява неблагоприятният ефект върху изхода от бременността, който се предизвиква от покачените нива на прогестерона. Според най-скорошни проучвания, повишените нива на прогестерон по време на овариалната стимулация правят ендометриума (лигавицата на матката) по-неподатлив към имплантирането на ембриона и следователно шансовете за забременяване се намаляват значително. Ако нивата на прогестерон се покачат над допустимото, се препоръчва да се замразят всички ембриони, вместо да се извършва свеж трансфер. Резултати от редица проучвания показват, че замразените ембриотрансфери се свързват с повишени шансове за успех, спрямо свежите трансфери, в случаите, когато става въпрос за завишени нива на прогестерон.
• Замразеният ембриотрансфер води до понижен риск от т.нар. овариален хиперстимулационен синдром, а едновременно с това запазва отлични шансове за успешна бременност. Екипът от лекари на СБАЛАГРМ „София” подбира внимателно протоколите за стимулиране, с цел да се избегне отключването на синдрома. Точно поради тази причина в нашата практика този синдром се среща в по-малко от 1% от пациентите. Все пак ако лекарят прецени, че пациентката попада в рисковата група (има голям брой фоликули и високи нива на естроген, внезапно покачване на теглото, натрупване на течност в тазовата област и т.н) той може да препоръча да се замразят наличните ембриони, вместо да се извърши свеж трансфер, тъй като евентуална бременност може допълнително да повиши риска от развитие на болестта.
• Замразените ембриони позволяват създаването на семейство на по-късен етап. Замразените ембриони запазват репродуктивния си потенциал далеч във времето, като по този начин ви позволяват сами да изберете най-подходящия момент за отглеждане на децата ви. Този вид трансфер може да забави биологичният ви часовник.

‍